导语：刚接手液相就要独立操作？带教的人自己也说不清流程？
本文按步骤梳理操作要点，帮助实验室人员建立标准化的操作习惯，减少柱压异常、峰形畸变等常见问题。
刚接手 HPLC 的实验室新手
操作流程需要统一的 QC 人员
希望建立或优化标准操作规程（SOP）的团队
开机前建议完成以下三项检查：
| 检查项 | 操作要点 |
|---|---|
| ✅ 查线 | 电源线、数据线、管路连接牢固；废液管插入废液桶 |
| ✅ 看液位 | 流动相瓶内溶剂足够，已过滤、脱气 |
| ✅ 倒废液 | 废液桶未满，防止溢出 |
原则：开机前完成检查，可有效避免后续操作中的常见问题。
等待操作系统完全加载。
建议顺序：泵 → 进样器 → 柱温箱 → 检测器
以安捷伦1260为例：
待各模块指示灯变为黄色或无色、完成自检后，再双击桌面 “仪器1联机” 图标进入化学工作站。
不同品牌仪器操作或有差异，请以官方手册为准。
将管路放入已过滤脱气的新流动相中
打开排气阀
设置流速 3~5 mL/min
冲洗 5~10 分钟
直到无气泡流出 → 关闭排气阀
装上色谱柱（注意柱上箭头方向与流向一致）
流速升至 1.0 mL/min
等待基线走平，一般约 30 分钟
基线平稳后，再进行进样操作，有助于获得更稳定的峰形和重现性。
未溶解的颗粒可能堵塞柱头
不过滤可能导致柱压升高，影响色谱柱寿命
编辑序列：样品瓶位置、样品名称、进样体积（常规 10~20 μL）
点击 运行
以下为推荐的关机顺序，特别是使用含盐流动相后，建议按此操作：
| 步骤 | 操作 | 目的 |
|---|---|---|
| 1 | 若使用了含缓冲盐流动相，先用纯水（或90:10水/有机相）冲洗 | 洗出盐分 |
| 2 | 切换为纯有机相（甲醇或乙腈）冲洗 | 置换系统，防腐保存 |
| 3 | 关检测器灯 → 停止泵 → 退出工作站 → 关电脑 → 关各模块电源 | 正常关机 |
| 4 | 拆下色谱柱，两端用堵头封好，放回包装盒或专用柱架 | 保护色谱柱 |
注意：含盐流动相建议先用水冲洗，再换有机相，以避免盐析出对色谱柱造成损伤。
| 阶段 | 操作要点 |
|---|---|
| 开机前 | 查线、看液位、倒废液 |
| 开机 | 电脑 → 泵 → 进样器 → 柱温箱 → 检测器 |
| 排气 | 开排气阀，3~5 mL/min，5~10 min |
| 平衡 | 装柱，1.0 mL/min，等待基线走平（约30 min） |
| 样品 | 流动相溶解 + 0.22 μm过滤 |
| 进样 | 编序列，10~20 μL，运行 |
| 关机 | 水冲30min → 有机相30min → 关灯停泵 → 退软件 → 关电源 → 拆柱封堵 |
排气后仍有气泡：可重复排气，检查流动相是否充分脱气，管路接头有无松动。
柱压突然升高：建议先检查保护柱和在线过滤器，再排查色谱柱是否污染（可联系专业维保）。
关机时忘记水冲（使用含盐流动相后）：建议立即用纯水以低流速冲洗至少1小时，再换有机相；但色谱柱寿命可能受影响。
掌握标准操作流程是实验室工作的基础。当仪器遇到故障、峰形异常、合规认证等问题时，专业的技术支持可以节省时间与成本。
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本文内容仅供参考，具体操作请以您所使用设备的官方手册为准。文中提及的第三方品牌名称均为其各自权利人所有，提及不表示任何授权或合作关系。
